差距商品化试剂对于临床血清样本HBV DNA定量检测服从的影响 （三）

2.3.4 3种检测措施的差距床血测服不同性合成

对于24例慢性HBV熏染患者血清样本，3种试剂C、商品D以及E的化试HBV DNA定量服从的不同性合私见图4～6。试剂C与D检测服从的剂对差值平均值为0.28 log10 IU/mL,差值尺度差为0.30 log10 IU/mL,95%不同性领土为0.28±1.96×0.30(-0.30,0.86),95.83%(23/24)的点在95%不同性领土之内，其不同性领土规模内试剂C以及D测定值的于临影响最大差距为0.85 log10 IU/mL(图4)。试剂C与E检测服从的清样差值平均值为0.80 log10 IU/mL,差值尺度差为0.72 log10 IU/mL,95%不同性领土为0.80±1.96×0.72(-0.62,2.21),95.83%(23/24)的点在95%不同性领土之内，其不同性领土规模内试剂C以及E测定值的量检最大差距为1.96 log10 IU/mL(图5)。试剂D与E检测服从的差距床血测服差值平均值为0.51 log10 IU/mL,差值尺度差为0.64 log10 IU/mL,95%不同性领土为0.51±1.96×0.64(-0.74,1.77),91.67%(22/24)的点在95%不同性领土之内，其不同性领土规模内试剂D以及E测定值的商品最大差距为1.25 log10 IU/mL(图6)。3种试剂检测24例临床血清样本的化试差值扩散特色见表4。

2.3.5 19例逾越定量线性规模的剂对临床血清样本检测服从比力

对于检测服从低于至少一种试剂定量下限的11例样本(表5):2例样本，3种试剂均未检出；2例样本，于临影响试剂C以及D均检出，清样但均低于其定量线性下限，量检而试剂E未检出；7例样本，差距床血测服试剂C以及D的检测服从均在其定量线性规模内，经Wilcoxon标志秩以及魔难，试剂C与D的检测服从间差距无统计学意思(P=0.498),而试剂E有2例未检出，此外5例虽检出，但均低于其定量线性下限。对于检测服从高于至少一种试剂定量下限的8例样本(表5):1例样本，检测服从均高于3种试剂响应定量下限；1例样本，高于试剂C以及D的线性下限，试剂E检测的服从为8.42 log10 IU/mL;2例样本，试剂C的检测服从高于其线性下限，试剂D的检测服从在其定量线性规模内，分说为7.3八、7.91 log10 IU/mL,试剂E的检测服从在其定量线性规模内，分说为7.1七、7.68 log10 IU/mL;4例样本，试剂C以及D的检测服从均高于其线性下限，试剂E检测的服从分说为7.5七、6.7五、7.3二、6.96 log10 IU/mL。

2.3.6试剂C以及D检测临床血清样本的相关性合成

对于43例慢性HBV熏染患者血清样本，其中有31例血清样本的检测服从均在试剂C以及D的定量规模内，相关性合成发现关连系数r=0.966(P<0.001),回归方程Y=0.903X+0.036。将试剂C检测这31例血清样本所患上的服从以2000 IU/mL为截断，分为两组：≥2000 IU/mL组有18个标本，试剂C与D检测服从的关连系数r=0.950(P<0.001),回归方程Y=0.986X-0.235;<2000 IU/mL组有13个标本，试剂C与D检测服从的关连系数r=0.710(P=0.007),回归方程Y=0.672X+0.757,揭示低病毒血症时2种试剂的检测服从相关性较差。

3品评辩说

HBV DNA是乙型肝炎诊治中最紧张的份子标志物，可用于判断治疗指征以及监测治疗等，好比指南建议及早识别病毒学突破、调解抗病毒治疗，而病毒学突破(viral breakthrough)是指患者血清HBV DNA水平与最低值比照回升逾越1 log10 IU/mL(10倍)。慢性HBV熏染者的精准规画高度依赖于HBV DNA的准判断量，而影响HBV DNA定量精确性的因素良多，搜罗核酸提取所用样本量、核酸提取措施、样品中酶抑制剂、荧光定量PCR仪、PCR反映系统中模板浓度、PCR引物以及荧光探针等。HBV DNA在差距的试验室可能运用差距的试剂检测，试剂的差距可能修正病毒载量服从，导致HBV DNA定量服从偏高或者偏低，特意是在医学抉择水平，因此可能影响临床抉择规画。此外试验室在替换检测试剂时，临床不同性是最紧张的目的，经由它来分说服从的等效性。因此用于患者诊断或者治疗规画的抉择规画不光基于患者的形态，而且可能还依赖于当时所运用的检测措施以及试剂。

当初我国市面上有多种国家药品把守规画局(NMPA)称许的基于荧光定量PCR技术的HBV DNA定量检测商品化试剂盒。本钻研抉择了2种进面试剂以及3种国产试剂(表1),2种进面试剂A以及B是当初国内通用的HBV DNA定量试剂，但由于价钱高昂、检测老本高而在我鼎祚用有限，更多的试验室用的仍是国产试剂。因此抉择了3种国产试剂C、D以及E,为当初国内市场占有率较高的3种试剂，均接管各自配套的半自动化磁珠式核酸提取仪妨碍核酸提取。由于差距型号的荧光定量PCR仪可能影响检测服从,将3种试剂均在COBAS®Z480全自动荧光定量PCR合成仪上妨碍扩增。

本钻研主要品评辩说运用差距的试剂检测临床血清标本HBV DNA的服从不同性，以评估差距试剂的临床功能以及在同样艰深临床实际中交流运用的可接受性。本钻研分为两部份，第一部份品评辩说差距试剂的差距是否影响HBV DNA检测服从，首先运用小样本量的临床混合血清样本对于此妨碍验证，发现两种进面试剂A以及B的检测服从差距无统计学意思，而C、D以及E 3种国产试剂仅有C与试剂A的检测服从间无统计学差距，试剂D、E的检测服从均清晰低于试剂A(P<0.05),揭示这3种国产试剂的检测功能可能与国内公认的进面试剂之间存在差距；进一步验证3种国产试剂的检测功能，发现2个水平国家尺度物资的实际检测值与其靶值的差值均小于±0.4 log10 IU/mL,适宜我国NCCL室间品质评估尺度HBV DNA定量检测的可接受规模≤±0.4 log10 IU/ml;3种国产试剂C、D、E的CV均小于5%,适宜国内上罕用的可接受定量尺度CV≤5%,因此3种试剂的检测功能(精确度以及详尽度)均知足临床运用要求。

本钻研第二部份扩展样本量品评辩说3种国产试剂在检测临床血清样本的定量服从不同性以及临床功能是否存在差距，发现试剂E的检出率略低于试剂C以及D,可能存在漏检；3种国产试剂检测24例临床血清样本(3种试剂的检测服从均在其定量规模内)的服从在统计学上差距有统计学意思，而且合成发现：试剂C与D的相关性以及不同性较好、D与E次之、C与E最差；进一步合成试剂C以及D检测31例临床血清样本(2种试剂的检测服从均在其定量规模内)的服从发现，2种试剂检测低病毒载量的相关性与高病毒载量时比照差。这些均揭示3种HBV DNA定量试剂的临床功能差距有统计学意思。

本钻研中3种国产试剂的精确度以及详尽度均适宜国家要求，但对于临床血清样本的服从却存在清晰差距，其原因可能搜罗：①核酸提取功能可能存在差距：尽管3种国产试剂都是接管敏感的磁珠法提取核酸，但血清上样量差距，好比试剂E的血清上样体积是C的3倍而洗脱体积、退出PCR系统的模板体积均相同(表1),实际上E的PCR反映系统中DNA浓度应高于C,但E的检出率却低于C,揭示核酸提取功能可能存在差距；②PCR扩增功能可能存在差距：由于临床血清样本中存在PCR抑制剂如血红卵白、肝素等，3种试剂的抗干扰能耐可能不不同，从而导致其扩增功能可能存在差距；③检测差距基因型以及突变病毒株的能耐可能存在差距：3种试剂宣称的检测亚型稍有差距，但究其各自能耐若何未验证；3种试剂的引物以及探针序列可能并不相同，HBV是一种高度变异的DNA病毒，抗病毒治疗中HBV DNA序列可能爆发耐药性突变，若突变位于引物或者探针散漫地域，则可导致样本的病毒载量被低估；Liu等建议准判断量HBV DNA可能需要两个靶标，好比基于S以及C地域的双重实时PCR检测。

总之，本钻研发现3种罕用国产试剂定量检测临床血清样本HBV DNA的功能存在清晰差距，在老例临床实际中交流用于临床抉择规画时务必谨严。但由于本钻研评估临床功能时所用血清样本量较小，是否影响临床抉择规画有待进一步钻研。

申明：本文所用图片、翰墨源头《临床血液学杂志》，版权归原作者所有。如波及作品内容、版权等下场，请与本网分割删除了。

相关链接：血清样本，核酸，抗病毒

(责任编辑：时尚)